вторник, 12 апреля 2016 г.

Разработан метод быстрого определения активности гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови

Банкированная неродственная пуповинная кровь обеспечивает доступ к трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) пациентам, у которых отсутствует соответствующий донор костного мозга. Тем не менее, у 10-15% пациентов развивается отторжение трансплантата или наблюдается замедленное приживление. Это может быть связано, как минимум, частично, с недостаточной активностью выбранных образцов пуповинной крови. 

Активность образца пуповинной крови обычно оценивается перед криоконсервацией, при этом не принимаются во внимание изменения активности ГСК, которые происходят во время замораживания и оттаивания. Метод колониеобразования (colony forming units, CFU), как было показано ранее, может быть использован для прогнозирования активности образца пуповинной крови, которая определяется как способность к приживлению в организме пациента на 42 день после трансплантации. Однако исследование этим методом сложно стандартизировать, кроме того, для его выполнения необходимо 2 недели. 

В связи с этим, авторы данной публикации разработали метод быстрого определения активности образца пуповинной крови с использованием мультипараметрической проточной цитометрии. Этот метод заключается в подсчете клеток, экспрессирующих высокий уровень фермента альдегиддегидрогеназы (ALDHbr клетки) наряду с оценкой количества жизнеспособных CD45+CD34+ клеток. Эти исследования выполняются на сегменте, который добавляется к криоконсервированному образцу пуповинной крови.

Авторы работы провели валидацию исследования с предварительно заданными критериями достоверности, специфичности, воспроизводимости, внутрилабораторной воспроизводимости и линейности. Затем были проспективно изучены корреляции между содержанием ALDHbr, CD34+ клеток и клеток, способных образовывать колонии in vitro, в сегментах образцов пуповинной крови за период, равный 5 годам (n=3908). Было показано, что содержание ALDHbr клеток (r=0,78; 95% ДИ: 0,76-0,79), а не CD34+ клеток (r=0,25, 95% ДИ: 0,22-0,28) сильно коррелирует с содержанием CFU в образце пуповинной крови.

Полученные результаты позволяют предположить, что исследование экспрессии альдегиддегидрогеназы в сегменте образца пуповинной крови является надежным методом оценки активности ГСК в нем. Этот метод позволяет быстро провести отбор и выдачу образца пуповинной крови, основываясь на его характеристиках, которые были оценены до его выдачи из Банка пуповинной крови в медицинское учреждение для трансплантации.

Литература:

Shoulars K.W., Noldner P., Troy J.D., Cheatham L., Parrish A., Page K., Gentry T., Balber A.E., Kurtzberg J. Development and validation of a rapid, aldehyde dehydrogenase bright-based, cord blood potency assay. Blood. 2016 Mar 11. pii: blood-2015-08-666990. [Epub ahead of print]


Комментариев нет:

Отправить комментарий