Для криоконсервации гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови необходимы оптимальные условия охлаждения, которые в большинстве случаев достигаются использованием программных замораживателей. Процесс охлаждения может быть прерван в связи со многими факторами, поэтому правильные действия в ответ на прерывание криоконсервации очень важны для предотвращения потери ценных клеток.
В рамках этой работы образцы пуповинной крови (n = 6), содержащие 10% диметилсульфоксида, были заморожены с помощью программного замораживателя от +4 до -80°C. При достижении разных температур во время заморозки образцы перемещали либо сразу в пары жидкого азота, либо в холодильник (температура -80°C), где их хранили 18,1 ± 0,6 часов до перемещения в пары жидкого азота. Образцы оставались в парах жидкого азота в течение 127 ± 48,1, после чего оценивались выход, жизнеспособность и выживаемость ядросодержах клеток и/или CD45+ клеток, а также CD34+ клеток и колониеобразующих единиц гранулоцитов-макрофагов (КОЭ-ГМ).
Результаты оценки размороженной пуповинной крови всеми методами значительно не различались при перемещении образца в холодильник (-80°C) перед помещением в пары жидкого азота, при какой температуре бы не был прерван процесс охлаждения. С другой стороны, были выявлены существенные различия при переносе образцов непосредственно в пары жидкого азота. Однако полученные результаты зависели от типа исследования и способа подсчета жизнеспособности.
Таким образом, результаты этой работы свидетельствуют о том, что образцы пуповинной крови могут быть перенесены в холодильник, поддерживающий температуру -80°C, в любой момент охлаждения с помощью программного замораживателя. При этом помещать в пары жидкого азота следует только образцы, которые достигли температуры -40°C или ниже. Также авторы отмечают, что в случае прерывания процесса замораживания в качестве рутинного метода оценки процента выживших гемопоэтических стволовых клеток следует использовать определение КОЭ-ГМ.
В рамках этой работы образцы пуповинной крови (n = 6), содержащие 10% диметилсульфоксида, были заморожены с помощью программного замораживателя от +4 до -80°C. При достижении разных температур во время заморозки образцы перемещали либо сразу в пары жидкого азота, либо в холодильник (температура -80°C), где их хранили 18,1 ± 0,6 часов до перемещения в пары жидкого азота. Образцы оставались в парах жидкого азота в течение 127 ± 48,1, после чего оценивались выход, жизнеспособность и выживаемость ядросодержах клеток и/или CD45+ клеток, а также CD34+ клеток и колониеобразующих единиц гранулоцитов-макрофагов (КОЭ-ГМ).
Результаты оценки размороженной пуповинной крови всеми методами значительно не различались при перемещении образца в холодильник (-80°C) перед помещением в пары жидкого азота, при какой температуре бы не был прерван процесс охлаждения. С другой стороны, были выявлены существенные различия при переносе образцов непосредственно в пары жидкого азота. Однако полученные результаты зависели от типа исследования и способа подсчета жизнеспособности.
Таким образом, результаты этой работы свидетельствуют о том, что образцы пуповинной крови могут быть перенесены в холодильник, поддерживающий температуру -80°C, в любой момент охлаждения с помощью программного замораживателя. При этом помещать в пары жидкого азота следует только образцы, которые достигли температуры -40°C или ниже. Также авторы отмечают, что в случае прерывания процесса замораживания в качестве рутинного метода оценки процента выживших гемопоэтических стволовых клеток следует использовать определение КОЭ-ГМ.
Литература
Yang H., Pidgorna A., Loutfy M.R., Shuen P.
Effects of interruptions of controlled-rate freezing on the viability of umbilical cord blood stem cells. Transfusion. 2015 Jan;55(1):70-8. doi: 10.1111/trf.12774. Epub 2014 Jul 14.
Комментариев нет:
Отправить комментарий